Стереоультраструктурное и морфометрическое исследование ткани

Исследование сосудов костного мозга

Важная роль стромальных и кроветворных клеток, а также сосудов костного мозга при формировании регенерата кости в условиях чрескостного остеосинтеза убедительно показана в работах Г. А. Илизарова с соавторами.

Вместе с тем, имеются лишь единичные работы, в которых представлена сканирующая электронная микроскопия костного мозга с элементами морфометрии его кровеносных сосудов.

Цель исследования сотрудников РНЦ "ВТО" - изучить стереоультраструктурные и морфометрические особенности гемопоэтической ткани и кровеносных сосудов красного костного мозга грудины половозрелых крыс.

В эксперименте использовали 14 крыс-самцов, с массой тела 200-250 г, в возрасте 5 месяцев. Животных эвтаназировали передозировкой ингаляционного эфирного наркоза. Второй и третий сегменты грудины выделяли, фиксировали в растворах параформальдегида и глутаральдегида, обезвоживали и без декальцинации заливали в аралдит.

Из полученных блоков на ультрамикротоме «LKB Nova» при помощи алмазных ножей изготавливали полутонкие срезы, окрашивали метиленовым синим и основным фуксином.

На аппаратно-программном комплексе «ДиаМорф» оцифровывали изображения гистологических препаратов при увеличении 1000. Используя компьютерную программу «ВидеоТест-Мастер 4,0» в зоне костного мозга, прилегающей к эндосту, на поперечных срезах измеряли: диаметр и площадь сечения синусоидов, суммарную площадь клеток внутри синусоидов (мкм).

Определяли суммарную площадь сечения клеток крови, локализованных в тест-объеме периваскулярной паренхимы стромы и в просвете капилляров гемопоэтической ткани костного мозга. Используя полученные данные определяли степень проницаемости стенки капилляра, выраженную в процентах (Ирьянов Ю.М., Очеретина Р.Ю., 2007; рац. предл. № 20/2007).

Высчитывали суммарную площадь межклеточного пространства в тест-объеме периваскулярной паренхимы стромы костного мозга. Для определения достоверности различий использовали критерии Стьюдента и Вилкоксона.

Изучение кровеносных сосудов при заболевании костного мозга

Изготовляли дозированно коррозионные препараты на предметных стеклах и в блоках, частично удаляя из ткани аралдит раствором этиолята натрия. Окрашенные срезы исследовали при помощи светового микроскопа «OPTON 140», коррозионные препараты исследовали в сканирующем электронном микроскопе «JSM-840».

Изучение костного мозга грудины на полутонких срезах позволило сохранить на препаратах целостность системы кроветворных элементов и их микроокружения.

Установлено, что в петлях ретикулярной стромы красного костного мозга гемопоэтические клетки располагались группами. Эритробласты формировали вокруг макрофагов скопления - эритробластические островки, в форме спирали, в которых более крупные и зрелые клетки располагались по периферии. В центре островков располагались делящиеся клетки.

При сканирующей электронной микроскопии макрофаги имели характерную полигональную форму и крупные размеры, что позволяло легко отличить их от других клеток костного мозга.

Мегакариоциты были значительно крупнее макрофагов и располагались на внешней поверхности синусоидов. Кровяные пластинки локализовались в непосредственной близости от синусоидов и были соединены с мегакариоцитами цитоплазматическими мостиками, которые наблюдали и внутри синусоидов.

Вокруг синусоидов встречались небольшие группы лимфоцитов и моноцитов. В полости сосудов небольшого размера (диаметром 9,41 мкм) проникали отростки клеток лейкоцитарного ряда. Внутренняя поверхность стенки сосудов диаметром 24,2 мкм имела мелкобугристый микрорельеф.

При количественном анализе синусоиды разделяли на две группы. Синусоиды с диаметром 6-14,9 мкм (первая группа) составляли - 57,6 %, диаметром 15-24 мкм (вторая группа) - 42,4 %.

Полученные результаты свидетельствуют, что у интактных взрослых животных в красном костном мозге наблюдаются активные процессы ангиогенеза, которые сопровождаются увеличением размеров сосудов и повышением сосудистой проницаемости.

Ссылки по теме:

• Мозг и память
• Мозг как обезболивающее
• Восстановительные операции на повреждённом спинном мозге

Автор материала Елена Васильева, врач общей практики специально для Spinet.ru

Также стоит почитать: