Выделение, культивирование и исследование дифференцировочного потенциала клеток плаценты человека

Для нивелирования этико-правовых моментов клеточной терапии целесообразно примене­ние диплоидных культур, получаемых, в частности, из плацентарной стромы, содержащей до 80-90 % регио­нальных мезенхимальных стромальных клеток (МСК). Несомненным преимуществом МСК плаценты являет­ся то, что процедура сбора материала абсолютно безопасна и безболезненна. Способность к делению клеток плаценты в 8-10 раз выше, чем у стволовых клеток, выделяемых из различных тканей взрослого организма. Такие клетки можно использовать для восстановления функции поврежденных костей, но перед реализацией остеорегенеративного потенциала этих клеток необходимо отработать протоколы выделения, культивирования и индукции дифференцировки в системе in vitro.

Цель исследования, проведённого в ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор»: выделение мезенхимальных стволовых клеток из плаценты человека, отработка условий культивирования и криоконсервации полученной культуры, исследование дифференцировочного потенциала.

Клетки выделены в ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» в 1991 г. из плаценты человека. Онко­логические, венерические заболевания, гепатит, туберкулез, генетические и врожденные аномалии в анамнезе донора отсутствовали. Культура клеток имеет стабильный диплоидный кариотип, сохраняет активный ростовой потенциал и специфические свойства в течение минимум 30 пассажей, легко поддается пассирова­нию. Штамм криоконсервирован на 8 и 12 уровнях пассажей, что обеспечивает возможность его длительного использования. Культивированные адгезивные клетки стромы плаценты были охарактеризованы по цито- фенотипическим признакам, по способности к дифференцировке в жировую и костную ткань, проверены на инфекционную безопасность.

В ходе работы методом проточной цитофлюориметрии было проведено иммунофенотипирование исследуемых клеток, которое выявило наличие маркеров мезенхимальных стромальных клеток (CD90 - 95,2 %, CD73 - 74,3 %, CD105 - 95,1 %) и отсутствие маркеров лимфоцитов и гемопоэтических кле­ток (CD45 - 0,0 %, CD34 - 0,2 %), причем иммунофенотип не изменялся в ходе культивирования.

Для индукции дифференциации в адипогенном направлении в ростовую питательную среду добавляли 0,5 мМ изобутилметилксантина, 1 мкг/мл инсулина, 1 мкМ дексаметазона, в остеогенном направлении - 0,5 мМ изобутилметилксантина, 1 мкМ дексаметазона, 50 мкМ аскорбат-2-фосфата. Адипоциты фиксировали и окрашивали в растворе красного масляного, остеобласты фиксировали и окрашивали ализариновым крас­ным. Индукция дифференциации показала наличие у исследуемых культур клеток адипогенного и остеогенного дифференцированного потенциала. В ходе исследования выявлено отсутствие микробиологической, микологической, микоплазменной контаминации, подтверждена видовая идентичность исследуемой культу­ры клеток, что является необходимым условием для использования в регенеративной терапии.

Выделены и культивированы клетки из плаценты человека, которые по своим свойствам были подобны мезенхимальным стромальным клеткам, обладающие потенциалом для использования в кли­нической практике.

Автор материала Елена Васильева, врач общей практики специально для Spinet.ru

Также стоит почитать: